Bioquímica · Prácticas Húmedas · Bloque IV

Práctica 4 — Pipeteo y micropipetas

Laboratorio virtual: elige la micropipeta adecuada, domina la técnica de los dos topes, reconoce los errores más frecuentes y verifica exactitud y precisión por gravimetría.

Duración105 min

Facultad de Medicina · UNAMDepartamento de Bioquímica

Micropipeta de volumen variable

Selecciona la micropipeta adecuada y ajusta el volumen. El instrumento sólo es exacto dentro de su intervalo nominal: usar una pipeta por debajo del 10 % de su capacidad es uno de los errores más frecuentes del laboratorio.

🔧 Ajuste del volumen

Volumen seleccionado100.0 µL

0 µL1000 µL

100.0

µL

contador de tambor

📐 Exactitud esperada del instrumento

± 0.8 %

Error sistemático máximo admisible a este volumen

Intervalo nominal10 – 100 µL

Volumen seleccionado100.0 µL

% de la capacidad máxima100 %

Error sistemático admisible± 0.8 µL

Volumen aceptable99.2 – 100.8 µL

Regla práctica

Elige siempre la pipeta más pequeña que cubra el volumen deseado, y trabaja de preferencia en el tercio superior de su intervalo. El error relativo crece de forma pronunciada al acercarse al límite inferior: medir 2 µL con una pipeta de 1000 µL puede tener un error superior al 50 %.

📋 Selección correcta de la micropipeta

📏

Nunca fuerces el tope

Girar el tambor por encima del volumen máximo o por debajo del mínimo descalibra el mecanismo interno. Si necesitas un volumen fuera del intervalo, cambia de pipeta: no fuerces el ajuste.

🔻

Aproximación descendente

Ajusta el volumen bajando desde un valor mayor al deseado. Si te pasas, sube de nuevo por encima y vuelve a bajar: así se elimina la holgura mecánica (juego) del tornillo y se mejora la reproducibilidad.

🧊

Temperatura y densidad

Las micropipetas son de desplazamiento de aire y se calibran con agua a 20–25 °C. Los líquidos viscosos, volátiles o de densidad distinta introducen error; para ellos se usa pipeteo inverso o pipetas de desplazamiento positivo.

Técnica de pipeteo

La micropipeta de desplazamiento de aire tiene dos topes. Usarlos en el orden correcto es lo que distingue el pipeteo directo del inverso, y es la causa más común de error sistemático cuando se confunden.

⬇️ Los dos topes del émbolo

Posición del émboloReposo

Reposo2.º tope

✅ Pipeteo directo (rutinario)

Coloca una punta nueva presionando en firme; nunca la ajustes golpeando la pipeta.
Presiona el émbolo hasta el primer tope antes de introducir la punta en el líquido.
Sumerge la punta 2–3 mm y mantén la pipeta vertical.
Suelta el émbolo lentamente; espera 1–2 s a que el líquido suba por completo.
Retira la punta rozando la pared del recipiente para eliminar el exceso exterior.
Descarga apoyando la punta en la pared, a 30–45°: baja al primer tope y, tras una breve pausa, al segundo tope para expulsar el residuo.
Retira la punta del líquido antes de soltar el émbolo, y desecha la punta.

Pipeteo inverso: cuándo usarlo

Para líquidos viscosos, espumosos o volátiles (suero, glicerol, detergentes) se aspira hasta el segundo tope y se descarga sólo hasta el primero, dejando el exceso en la punta. Así se compensa la película que queda adherida y se evita subdosificar.

⚠️ Errores frecuentes y su efecto

Exactitud y precisión — verificación gravimétrica

La calibración de una micropipeta se comprueba pesando el agua dispensada: 1 mg de agua ≈ 1 µL a 20 °C. Simula una serie de mediciones y evalúa el error sistemático (exactitud) y el coeficiente de variación (precisión).

⚖️ Serie gravimétrica simulada

Volumen nominal100 µL

Sesgo del instrumento (exactitud)0.0 %

−6 %+6 %

Dispersión de la técnica (precisión)0.5 %

0.1 %8 %

Réplica	Masa (mg)	Volumen (µL)	Desv. (µL)

📊 Evaluación del desempeño

Media100.0 µL

Desviación estándar0.50 µL

Error sistemático (exactitud)0.0 %

Coeficiente de variación (precisión)0.50 %

Veredicto ISO 8655—

Banco de problemas

Diez ejercicios de gravimetría, error sistemático, coeficiente de variación, selección de micropipeta y diluciones. Ingresa tu resultado, verifica y consulta el procedimiento si lo necesitas.

Bibliografía científica

Fuentes que sustentan esta práctica: manejo y calibración de micropipetas, conceptos metrológicos de exactitud y precisión, verificación gravimétrica y buenas prácticas de laboratorio. Los enlaces dirigen a la norma o al DOI correspondiente.

📏 Normas de metrología para instrumentos volumétricos

Organización Internacional de Normalización. ISO 8655-1: Piston-operated volumetric apparatus — Part 1: Terminology, general requirements and user recommendations. 2.ª ed. Ginebra: ISO; 2022.norma
Organización Internacional de Normalización. ISO 8655-2: Piston-operated volumetric apparatus — Part 2: Pipettes. 2.ª ed. Ginebra: ISO; 2022.tolerancias
Organización Internacional de Normalización. ISO 8655-6: Piston-operated volumetric apparatus — Part 6: Gravimetric reference measurement procedure for the determination of volume. 2.ª ed. Ginebra: ISO; 2022.gravimetría
Oficina Internacional de Pesas y Medidas (BIPM) et al. Vocabulario Internacional de Metrología (VIM): conceptos fundamentales y generales, y términos asociados. 3.ª ed. JCGM 200:2012. DOIexactitud vs. precisión

⚖️ Verificación gravimétrica y fuentes de error

Tanaka M, Girard G, Davis R, Peuto A, Bignell N. Recommended table for the density of water between 0 °C and 40 °C based on recent experimental reports. Metrologia. 2001;38(4):301–309. DOIdensidad del agua
Curtis RH. Performance verification of manual action pipets. Am Clin Lab. 1994;13(3):8–9.
Ewald C, Vogt L, Zhu S, et al. Airborne contamination and pipetting: sources of variability in the analytical laboratory. Accred Qual Assur. 2019;24:301–309. DOI

🧪 Buenas prácticas de laboratorio y técnica

Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (CLSI). GP31-A: Laboratory Instrument Implementation, Verification, and Maintenance; Approved Guideline. Wayne, PA: CLSI; 2009.
Burtis CA, Bruns DE. Tietz. Fundamentos de química clínica y diagnóstico molecular. 7.ª ed. Barcelona: Elsevier; 2015. (Instrumentación básica del laboratorio; análisis de errores.)
Martínez F, Pardo JP, Riveros H. Bioquímica de Laguna y Piña. 8.ª ed. México: Editorial Manual Moderno; 2018.
Harris DC. Análisis químico cuantitativo. 3.ª ed. Barcelona: Reverté; 2007. (Tratamiento estadístico de datos: media, desviación estándar y coeficiente de variación.)

Nota docente: las tolerancias de error sistemático y coeficiente de variación empleadas en el simulador son las de la norma ISO 8655-2 para micropipetas de volumen variable, evaluadas a volumen nominal y al 10 % del nominal; los valores intermedios se interpolan con fines didácticos. La equivalencia 1 mg de agua ≈ 1 µL supone agua destilada a 20 °C (densidad 0.9982 g/mL) sin corrección por empuje del aire, que en una verificación formal sí debe aplicarse.